Главным противником Российского государства на западных границах в первой трети XVI века было **Великое княжество Литовское**.
**Ответ: 2) Великое княжество Литовское**
*Объяснение:* В указанный период Великое княжество Литовское, включавшее в себя территории современных Беларуси и Украины, являлось основным соперником Московского государства в борьбе за западнорусские земли.